Phusion 熱啟動II高保真PCR聚合酶的優勢

產品優勢

• 在室溫下構建反應
• 反應構建期間無非特異性擴增和引物降解現象
• 借助熱啟動技術，無需等待即可重新激活
• 高保真度 （52X Taq）
• 延伸時間短 （15-30 s/kb），可實現快速 PCR
• 反應穩健，幾乎無需優化
• 可以盡可能少的酶用量實現更高的產物產率
• 可直接上樣至凝膠

Phusion 熱啟動 II 高保真 DNA 聚合酶由 Phusion DNA 聚合酶和可逆結合的特異性 Affibody 配體（可在室溫下抑制 DNA 聚合酶活性）混合而成，故在用其擴增時不會產生非特異性產物。Affibody 配體還可抑制聚合酶的 3'→5' 核酸外切酶活性，從而防止在反應構建過程中引物和模板 DNA 降解。在促進聚合酶活性的溫度下，配體得到釋放，使聚合酶活化。Phusion 熱啟動 II DNA 聚合酶在高溫下立即重新激活，因此不需要在 PCR 方案中單獨設置活化步驟。
Phusion Green 熱啟動 II 高保真 PCR 預混液為方便的 2X 混合物，旨在盡可能減少移液步驟。預混液含有 Phusion 熱啟動 II DNA 聚合酶、核苷酸和經過優化的反應緩沖液（包括 MgCl₂）。緩沖液還含有一種密度試劑和兩種示蹤染料，用于 PCR 產物直接凝膠上樣。

Phusion Flash 高保真 PCR 預混液和 Phusion Hot Start II 高保真 PCR 預混液有什么區別？

Phusion Hot Start II 高保真 PCR 預混液是一種基于 Phusion Hot Start II DNA 聚合酶的 2X 即用型溶液。它專為最高保真度（52X Taq）和特異性而設計。Phusion Flash 高保真 PCR 預混液基于改良的 Phusion 熱啟動 II DNA 聚合酶，可實現極短的循環時間，并具有較低的保真度 （25X Taq）。

Phusion Hot Start II 高保真 PCR 預混液中使用哪種緩沖液？

Phusion 熱啟動 II 高保真 PCR 預混液基于 Phusion HF 緩沖液。為了擴增富含 GC 的靶標，我們建議添加 3% DMSO。

Phusion Hot Start II 高保真 PCR 預混液中的酶濃度是多少？

Phusion Hot Start II DNA 聚合酶濃度經過優化，可在大多數反應中獲得良好的結果。當按照說明設置PCR反應時，Phusion酶的最終濃度為50μL反應中的1U（20μL反應中的0.4U）。

Phusion DNA 聚合酶是否添加非模板依賴性 3'-A 突出端？

Phusion DNA 聚合酶產生鈍的最終產物;因此，建議進行鈍端克隆。如果需要 TA 克隆，可以通過在鈍 PCR 產物中添加 A 突出端來進行，例如 Taq DNA 聚合酶 （Cat.不。EP0401）。然而，在添加突出端之前，通過仔細純化 PCR 產物來去除所有 Phusion DNA 聚合酶非常重要，因為 Phusion DNA 聚合酶中的校對活性非常強。任何剩余的 Phusion DNA 聚合酶都會降解 A 突出端，從而再次產生鈍端。

Phusion DNA 聚合酶可以以 1 秒/kb 的速度延伸嗎？

是的，這是可能的，尤其是在擴增較小的擴增子時。Phusion DNA 聚合酶的合成能力是 Pfu 的 10 倍。我們建議將 Phusion Flash PCR 預混液的延長時間延長至 15 s/kb。15 s/kb 是一個保守的值，我們可以承諾幾乎可以與任何擴增子一起使用。在許多情況下，可以使用明顯更短的延伸時間 （0-5 s/kb），而不會影響產量。Phusion Flash DNA 聚合酶與其他快速聚合酶的區別在于，PCR 方案中的所有步驟都可以縮短，包括退火和變性。與任何其他聚合酶相比，這導致了極快的方案。